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測定蛋白質含量的方法有哪些,其原理各是什么

 更新時間:2022-06-29 點擊量:2646

Bradford法測定蛋白質濃度
實驗原理:
雙縮脲法(Biuret法)和Folin—酚試劑法(Lowry法)的明顯缺點和許多限制,促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法(Bradford法),是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點,因而正在得到廣泛的應用。這一方法是目前靈敏度*高的蛋白質測定法。考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(max),由465nm變?yōu)?95nm,溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。在595nm下測定的吸光度值A595,與蛋白質濃度成正比。

 

Bradford法的突出優(yōu)點是:
(1)靈敏度高,據估計比Lowry法約高四倍,其低值蛋白質檢測量可達1?g。這是因為蛋白質與染料結合后產生的顏色變化很大,蛋白質-染料復合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質濃度的變化比Lowry法要大的多。
(2)測定快速、簡便,只需加一種試劑。完成一個樣品的測定,只需要5分鐘左右。由于染料與蛋白質結合的大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時內保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性*好。因而*不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。
(3)干擾物質少,如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。

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